Песнь можно разделить на три части. В первой части рассказывается о несчастной любви опричника Кирибеевича к жене купца Калашникова. Во второй части в центре сюжета описание приставаний опричника к Алене Дмитриевне, что обернулось позором для семьи купца. Она вырывается и бежит к мужу, прося его о защите. В заключительной части сцена сражения между Кирибеевичем и Калашниковым, смерть опричника и суд Ивана Грозного над купцом, которого также осуждают на смерть за убийство.